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    細胞因子實驗過程如何完成標記任務(wù)

    點擊次數(shù):298  更新時間:2025-03-27
    巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)是一種19.02kDa的造血生長因子,含有162個氨基酸殘基。該蛋白的活性:形式為同源二聚體,由成骨細胞分泌。M-CSF可控制單核細胞、巨噬細f胞和骨髓祖細胞的生成、分化和功能。M-CSF能夠通過結(jié)合其受體CSF-1R激活CSF-1信號通路。
    標記:
    1.將細胞培養(yǎng)基與EdU溶液按照500:1的比例混合,制成2×EdU標記培養(yǎng)基。
    2.提前將2×EdU標記培養(yǎng)基預(yù)熱,然后將150微升2×EdU標記培養(yǎng)基與等體積細胞培養(yǎng)基混合,獲得1×EdU溶液。
    【注】:
    ①不建議替換全部培養(yǎng)基,這樣可能會影響細胞增殖的速度。
    ②配置好的培養(yǎng)基建議現(xiàn)用現(xiàn)配,用量以沒過細胞為宜。
    3.孵育細胞2h,棄培養(yǎng)基。
    【注】:
    ①培養(yǎng)時間取決于細胞的增殖速度和生長狀態(tài)。
    ②大多數(shù)腫瘤細胞以及粘附細胞系均可采用2h的孵育時間。
    4.以1xPBS清洗細胞兩次,每次5min, 以除去未摻入DNA的EdU殘留。
    【注】:對于貼壁不牢的細胞可降低清洗強度。
    實驗步驟:
    1.將細胞以104-105個細胞/孔的密度接種在96孔板中,加入100μL培養(yǎng)基,含或不含待測化合物。在CO2培養(yǎng)箱中在37℃下培養(yǎng)細胞24小時。
    2.向板中加入10μL不同濃度的待測物質(zhì)。
    3.在培養(yǎng)箱中將培養(yǎng)板培養(yǎng)適當時間(如6、12、24或48小時)。
    4.向板的每個孔中加入10μL CCK-8溶液。小心不要將氣泡引入孔中。
    5.將平板在培養(yǎng)箱中孵育1-4小時。
    6.在讀板之前,在定軌振蕩器上輕輕混勻。
    7.使用酶標儀測量450nm處的吸光度。
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